中药两头尖的质量控制及其毒性研究 ——两头尖的毒性研究外文翻译资料

中药两头尖的质量控制及其毒性研究

——两头尖的毒性研究

7.1 介绍

两头尖粉末通常用于治疗风湿、神经痛和关节痛等。其主要成分包括三萜，类固醇，内酯，脂肪和油，糖和生物碱。《中国药典》记载中药两头尖中存在毒性，成人每次常用量为1～3g，孕妇禁用。然而，对于两头尖粉末的毒性尚未被确定。

术语LD₅₀（半数致死量）是指应用最小剂量预计能杀死50%动物数量的药品或化合物。因此，LD₅₀常被用作测定药物或化合物急性毒性的指标。对于LD₅₀，其致死量是基于（a）一个已知数量毒物的每体重量（毫克毒物/公斤体重）或（b）动物的每中毒量（毫克毒物/动物），在这两种情况下，动物的中毒数量能被准确广泛地反映出来。总的来说，LD₅₀是一个能导致被研究的有机群体50%的死亡率的估计剂量，代表一个统计测量剂量和响应之间的关系。绘制百分比（死亡率）对剂量或浓度的S形曲线。在低浓度时没有观察到影响，但在较高浓度，一些生物开始有响应，阈值是诱发响应的最低剂量，但到最后达到能杀死所有生物的一个剂量被计算出来（称为最大效应）。因为其剂量关系为S形曲线，因此LD₅₀或是剂量反应线的斜率都很难被估计出来。因此，几种方法模型已经被开发出来以延伸剂量反应曲线来更好的估计LD₅₀。鉴于上述所提及的事实，两头尖粉末的半数致死量已被首先确定，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇在适当秩序中提取物的最大耐受量（MTD）以及水和乙酸乙酯提取物的LD₅₀测定被建立在小鼠动物实验中。

7.2 实验

7.2.1 两头尖的萃取

两头尖粉末（过50网）用8倍量的水提取，3次，每六小时，把三次提取物互相混合，通过8层过滤装置过滤并干燥，干燥后的水提取物通过适当顺序的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇有机溶剂分别萃取（3倍水提取物量）萃取3次，减压过滤并集中收集。

7.2.2 实验小鼠

小鼠来自浙江医学科学院，体重20plusmn;2g，这些小鼠在一个环境恒定的动物房中饲养，温度控制在21plusmn;1℃，湿度适宜，空气流通（一个保持新鲜空气流通的系统），照明（12小时的明暗交替循环），并被给予干燥颗粒状食物（浙江医学科学院）和饮用水。把这些小鼠分成5个小组，每组10只动物且雌雄各半，动物在进行试验前被禁食10个小时。

7.2.3 毒性研究

在初步试验中，分别把50.83和508.3g/kg（植物粉末/体重）的样品溶于水中，并通过口服给药的方式给予小鼠口服，被给予508.3g/kg剂量的小鼠，在给药后30分钟内死亡，服用剂量为50.83g/kg的小鼠存活。因此，我们选择剂量为68．73，85．91，107．38，134．23，和1 67．79 g/kg（植物粉末/体重），几何因子为1.25进行口服毒性研究。剂量是0.5ml/10g体重。LD₅₀评价和95%的置信区间通过Blissrsquo; S法观察小鼠口服给药7天的死亡率计算而得。给予口服蒸馏水的两只小鼠作为对照动物。口服给药后进行24小时观察，可在5小时后观察到中毒症状，并持续观察7天。

7.2.4 急性毒性症状

在给药量为167.79g/kg（植物粉末/体重）的动物分组中口服给药后，动物表现出活动减弱和呼吸急促的症状，一些小鼠会舔自己的爪子，毛发直立，最后表现的焦躁不安，上蹿下跳，随后呼吸减弱直至死亡。小鼠死亡前出现剧烈抽搐和惊厥。其他组别的小鼠同样出现相同的症状，此时，在毒性症状出现前，减少剂量。大部分的小鼠口服给药后，在10分钟到5小时内死亡。在剂量为167.79g/kg（植物粉末/体重）的动物组中，所有动物在30分钟内死亡。死亡的小鼠进行解剖，观察主要器官并未发现任何异常。存活的小鼠在给药5小时后可恢复正常。实验结束后，把存活的小鼠进行解剖，观察主要器官也并未发现异常。

7.2.5 测定两头尖粉末水提取物的LD₅₀

通过Blissrsquo; S法准确计算和评估LD₅₀和95%的置信区间，通过SAS9.1.3软件计算结果，结果记录在附录B中。死亡率是每组10只小鼠除以存活小鼠数量所得的比值。组1和组2的小鼠全部死亡，组5的小鼠全部存活。LD50和95%的置信区间分别为104.5g/kg（植物粉末/体重）和95.45～115.29g/kg(植物粉末/体重) ，死亡率和实验结果记录在表7.1中。

表7.1 – 两头尖的水提取物LD₅₀值和95%的置信区间

7.2.6 两头尖的毒性分级

LD₅₀值和95%的置信区间分别为104.5g/kg（植物粉末/体重）和95.45～115.29g/kg(植物粉末/体重)，根据Blach well 法，人体的两头尖中毒剂量为10.45g/人，这表明，两头尖在临床上成年人常用的安全剂量为1～3g。两头尖的毒性分级详见表7.2。

TCM的毒性分级分为“高剧毒性”、“急性毒性”、“轻微急性毒性”。当一种中药只满足七个标准中的三个，它的毒性就可被降低到下一级。TCM的人体的中毒剂量为10.45g/kg,时间不超过30分钟，其LD₅₀值和95%的置信区间分别为104.5g/kg（植物粉末/体重）和95.45～115.29g/kg(植物粉末/体重)。因此，两头尖的毒性分级处于“急性毒性”和“轻微急性毒性”之间。

表7.2- TCM的毒性分级

毒性试验通常使用小鼠进行实验，观察时间在给药后的较短时间内。同时，对于中药毒性的评价并没有统一的毒性分级水平。因此，两头尖的毒性分级有待更进一步的研究。

7.2.7 两头尖的有机溶剂提取物的毒性研究

7.2.7.1 石油醚提取物的最大耐受量

最大耐受量是指最高剂量的辐射或药物治疗，在不引起毒性反应的情况下，得到预期的治疗效果。测定最大耐受量的目的在于确定长期暴露的化学物品是否会对健康人群产生不可接受的不良影响。由于短期毒性的作用，暴露水平就无法满足引起死亡的作用。为了减少测试对象（以及测试的成本）通常会使用最大剂量而不是一个较小的剂量。为了检测影响是否只是对于小部分机体中存在，在临床上也进行最大耐受量的研究。

石油醚提取物是通过把两头尖粉末的水提取物压碎并用石油醚提取（3倍水提取物的量）提取3次，并在减压过滤中集中收集。石油醚提取物溶解于水中，浓度为1000g/kg（植物粉末/体重）。40只ICR小鼠被用于测定最大耐受量，在口服给药前禁食10小时，给药剂量为0.5ml/10g体重。给予口服蒸馏水的动物为对照组。口服给药后，动物表现为活动减少和呼吸急促，实验组中在5小时内2只小鼠死亡，对照组所有小鼠都存活。给药后观察动物活动情况并持续观察14天。实验完成后，给小鼠称重并解剖，观察小鼠主要脏器的损失程度和重量，并未发现任何异常。所得结果记录于表-7.3。

表7.3 - 石油醚提取物对小鼠器官的效应指数（xplusmn;S）

实验组与对照组的体重对比并没有显著的变化。这表明，石油醚提取物在浓度为1000g/kg（植物粉末/体重）并不会引起明显毒性。

7.2.7.2 氯仿提取物的最大耐受量

氯仿提取物是采用氯仿通过萃取已经过石油醚萃取过的水提取物（3倍水提取物的量）提取3次，通过减压过滤并集中收集。

40只小鼠被用于测定最大耐受量，口服给药前禁食10小时，给药剂量为0.5ml/10g体重。口服蒸馏水的动物为对照组。口服给药后，动物表现出活动减少和呼吸急促。实验组4只小鼠死亡，对照组中所有动物都存活。给药后，观察动物情况，并持续观察14天。实验完成后，给小鼠称重并进行解剖，观察主要器官损害程度和重量变化，并未发现异常情况。所得结果记录于表-7.4。

表7.3 – 氯仿提取物对小鼠器官的效应指数（xplusmn;S）

实验组与对照组的体重对比并没有显著的变化。这表明，氯仿提取物在浓度为1000g/kg（植物粉末/体重）并不引起明显毒性。

7.2.7.3 乙酸乙酯提取物LD₅₀的确定

乙酸乙酯提取物是乙酸乙酯通过萃取已经过石油醚和氯仿提取的水提取物（3倍水提取物的量）提取3次，减压过滤并集中收集。

乙酸乙酯提取物的LD₅₀的确定与水提取物的LD₅₀的确定方法一样。在预实验中，1054和105.4g/kg（植物粉末/体重）溶解于蒸馏水中，并以口服给药的方式给小鼠喂药。被给予1054g/kg剂量的小鼠在给药后30分钟内死亡，被给予105.4g/kg的小鼠存活。因此，我们选择了剂量为402.73、520.19、647.10、802.42和1000.56g/kg(植物粉末/体重)，几何因子为1.25，进行口服毒性研究。给药剂量为0.5g/kg体重。

表7.5-乙酸乙酯提取物的LDlt;

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