槲皮素通过减轻氧化应激和炎症以防止全氟辛酸的肝损伤效应外文翻译资料

槲皮素通过减轻氧化应激和炎症以防止全氟辛酸的肝损伤效应

摘要：

本研究的目的是探讨槲皮素对全氟辛酸（PFOA）诱导的肝损伤小鼠的保护作用的影响及其作用机制。小鼠灌胃施用PFOA（10毫克/公斤/天）单独使用或与槲皮素（75毫克/千克/天）连续14天的组合。肝损伤是通过评估测量形态变化，肝功能，氧化应激，炎症反应和肝细胞凋亡。与PFOA单独处理的小鼠比较，同时补充槲皮素显著减少的肝损伤指标丙氨酸转氨酶，天冬氨酸转氨酶，碱性磷酸酶，乳酸脱氢酶和总胆汁酸。此外，槲皮素的治疗抑制氧化应激生物标记丙二醛的生产，过氧化氢和8-羟基-2-脱氧鸟苷，减少促炎的细胞因子的白介素6和环氧合酶-2和C-反应蛋白水平，并在PFOA处理的小鼠的肝下降TUNEL阳性细胞的数目。这些结果结合肝组织病理学证实槲皮素通过氧化应激表现出对抗潜在的衰减机制的保护作用PFOA引起的肝损害，减轻炎症化，抑制肝细胞凋亡，缓解PFOA引起的肝损伤。

1．引言

全氟化合物对动物和人类的健康的潜在的不利影响正成为越来越多的国际关心。全氟辛酸（PFOA），全氟化合物，被广泛用于生产的各种工业和消费产品，如食品包装，不粘平底锅特氟隆涂层，香波组分，浸渍的涂布等等。由于抗生物降解，全氟辛酸具有生物积聚性和环境持久性，并且广泛的被发在现野生动物和人类的身体。数据从NHANES 1999-2000年，2003-2004年，2005-2006年，2007-2008年和2009-2010表明，美国的PFOA几何平均含量在血清中分别为5.2，3.95，3.92，4.13和3.06ng/mL。

有越来越多的证据表明，PFOA会造成动物和人类各种各样的不利健康结果。动物实验已证实暴露于PFOA会引起多种毒性，包括肝中毒，致癌性，致突变性，发育毒性和免疫毒性。肝脏是PFOA诱导的毒性的主要靶器官。积累的证据表明，全氟辛酸会引起肝肿大，嗜酸性细胞浆，肝甘油三酯积累,液化性坏死和生化性坏死。

类黄酮来源于植物，且酚类化合物往往被作为食物，并具有有一些对人体健康有益的行为。槲皮素（3，3，4，5，7-五羟基），是多酚类黄酮家族的一个成员，广泛分布于水果，蔬菜和谷物，且经常被人类食用。槲皮素糖苷配基类黄酮是一种重要的存在,他的特点是苯基苯并结构（图1）而且广泛分布在不同类型的水果和蔬菜。槲皮素由于其抗氧化活动已受到广泛关注。它已经显示，针对诱发大鼠环境污染物的毒性，槲皮素通过它的抗氧化性能施加保肝作用。此外，槲皮素能防止氟化钠诱导大鼠肝脏和心脏的氧化应激。然而，保护PFOA引起的肝毒性尚未见报道。因此，本研究的目的是调查槲皮素对PFOA引起老鼠肝损伤的改善作用和潜在的保肝机制。槲皮素的效果水平，通过观察评定肝脏形态的变化，血清生化测量水平参数，以及确定炎症反应，氧化应激和凋亡的肝脏等参数，以确定炎症反应，氧化应激和凋亡的肝脏。

2．材料和方法

2.1实验动物和治疗

昆明小鼠（雄性，体重20-22克）购自南昌大学实验动物中心。全氟辛酸（纯度96％）购自Sigma-Aldrich公司（圣路易斯购买，MO，美国）。槲皮素（纯度ge;98％）购买于森弗生物技术（西安购中国）。实验室在开始实验之前，小鼠培养在恒定条件下保持（22plusmn;2℃，50％plusmn;10％的相对湿度，以及12小时光照/黑暗周期）配食物和自来水。动物适应条件1周。

所有的程序进行通过南昌大学动物伦理委员会（20130916号）根据南昌大学实验动物保健和使用指南。将小鼠随机分为四组，每组8只动物。（1）对照组：小鼠用水进行灌胃，每日一次。（2）PFOA组：小鼠分别给予PFOA10毫克/千克/天胃内，每天一次。（3）槲皮素组：小鼠给予75毫克/千克/天胃内，每天一次。（4）全氟辛酸 槲皮素组：在小鼠给予PFOA 10毫克/千克/天并且同时补充有槲皮素75毫克/千克/天。所有的动物治疗连续14天。在治疗期结束时，收集血液和肝样品用于随后的测量，将小鼠麻醉处死。

2.2 血清指标测量

将血样在13,000rpm离心在4℃下30分钟分离血清。血清谷丙转氨酶水平（ALT），谷草转氨酶（AST），碱性磷酸酶（ALP），乳酸脱氢酶（LDH）和总胆汁酸（TBA），数据用生化分析仪（7180，HITACHI，日本）测定。

2.3 组织学检查

肝组织固定在4％多聚甲醛，一系列酒精脱水，清除二甲苯的转变，嵌入式在石蜡，并切片在5微米。所述切片用苏木精和伊红染色。形态学变化下的观察光学显微镜（IX71，奥林巴斯，日本）。

2.4 氧化应激的测量

肝组织匀浆在冰冷的0.9％NaCl溶液。将匀浆以3000rpm离心30分钟，并慢慢倒出上清液用于生化分析。丙二醛的含量（MDA）和过氧化氢（H₂O₂）和超显示活动变位酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的肝组织匀浆均按照制造商的指示使用商业试剂盒测量（生物技术建成研究所，南京，中国）。在另外，8-羟基-2-脱氧鸟苷的水平（8-OHdG水平），一个为氧化性DNA损伤，可使用的ELISA试剂盒，按照制造商的说明（西唐生物科技，上海，中国）。

2.5炎症标记物的测定

炎症反应标记物白介素6水平（IL-6），环氧合酶-2（COX-2）和C反应蛋白（CRP）肝组织中用匀浆测定市售的ELISA试剂盒，根据制造商的说明（西唐生物科技，上海，中国）。

2.6 TUNEL法
末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记被用于在凋亡细胞的原位检测（TUNEL）测定 用市售的TUNEL试剂盒（西唐生物科技，南京，中国）。 TUNEL阳性肝细胞的数目进行计数

2.7 统计分析

所有数值都以平均值plusmn;标准差。之间的差异基团通过使用单向方差分析（ANOVA）进行分析在SAS统计软件。Plt;0.05显著不同。

3.结果

3.1 槲皮素治疗PFOA处理的小鼠对肝脏损伤的影响

血清AST，ALT，ALP，LDH和TBA水平进行了测量，以评估PFOA引起的肝损伤和槲皮素的保肝作用。与对照组相比较，连续口服14天全氟辛酸导致血清，ALT，AST，ALP，LDH和TBA水平显著增加。然而，同时补充槲皮素明显降低的这些生化水平标志物，肝功能中的PFOA处理的小鼠。在对照组和槲皮素组的生化标志物，无显著差异。

3.2槲皮素对PFOA处理的小鼠肝脏形态变化的影响

PFOA处理连续14天之后，肝脏切片CAL评估显示，肝脏发生了变化形态，包括紊乱的肝组织结构，水肿显著，空泡变性，肝细胞坏死和炎性细胞浸润。然而，所有这些由PFOA引起的病理改变均明显被同时给予槲皮素改善。这些不良的组织学变化是缺少的肝脏对照小鼠，并与槲皮素单独处理的小鼠显示出相同的正常肝组织学作为对照。

3.3槲皮素对PFOA处理的小鼠的肝脏氧化应激

MDA，H₂O₂，8-羟基脱氧鸟苷，SOD和CAT肝组织匀浆进行测定，以评估PFOA诱导的抗氧化性和槲皮素的抗氧化作用。PFOA连续曝光14天后，在肝脏组织中，与对照组比较丙二醛和H₂O₂显著增加，SOD和CAT活性显著下降。此外，接触PFOA明显升高的肝-8-OHdG的含量在小鼠的肝脏。然而与PFOA组比较，小鼠PFOA 槲皮素组显示MDA的水平显著下降，H₂O₂，8羟基脱氧鸟苷，SOD和CAT活性显着增加。与对照组比较，仅进行槲皮素处理组对MDA生产，H₂O₂和8羟基脱氧鸟苷和超氧化物歧化酶的活性没有效果。

3.4槲皮素对肝脏组织坏死中PFOA处理的小鼠

CRP水平，IL-6和COX-2的肝组织匀浆均测量用以评估PFOA诱导的炎症反应和槲皮素的消炎作用。口腔接触PFOA与对照组相比，肝脏显相性增加了CRP，IL-6和COX-2的水平。然而，同时补充槲皮素的全氟辛酸处理的小鼠，这些标记的肝水平抑制炎症的反应显著增加。同时，单独的槲皮素处理与对照组相比不会改变肝水平三种细胞因子。

3.5槲皮素对肝细胞凋亡的PFOA处理的小鼠

用核DNA片段的TUNEL标记检测

全氟辛酸引用肝细胞凋亡和槲皮素的抗凋亡作用。只有少数TUNEL阳性细胞的在小鼠的肝脏在对照组和槲皮素组。与对照组相比，TUNEL阳性细胞在肝脏中的数量PFOA明显增加组。然而，在PFOA处理的小鼠，同时进行槲皮素的给药显著减少了凋亡细胞的数量。

4.讨论

作为一个公共卫生问题，暴露于PFOA与许多相关的疾病在人类中，包括癌症，溃疡性结肠炎，高尿酸血症，心血管疾病，甲状腺疾病和肝细胞损伤[18-22]。槲皮素已被证实具有广泛生理的好处和生物效果，如心脏，保肝，神经保护，抗炎和抗癌活性。另外，在本研究中，我们槲皮素在老鼠体内对PFOA引起的肝损害的改善作用。肝组织学分析显示PFOA处理的小鼠的肝脏显著的形态学变化。然而，组织学诱发PFOA变化;同时进行槲皮素处理均明显改善。

血清AST，ALT，ALP，LDH和TBA是肝损伤的诊断最敏感的标志。肝细胞膜被破坏，这些细胞酶从损伤的肝被释放到血流，导致的血清酶浓度增加。大量血清酶泄漏到血液与中心坏死相关联，球囊荷兰国际集团变性和肝细胞浸润。在这项研究中，PFOA给药后，AST，ALT，ALP，LDH和TBA血清显著增长。然而，这些血清标志物升高的水平治疗同时进行显著减少与槲皮素，槲皮素暗示对由PFOA引起的肝损伤具有有保护作用。

在各种肝脏疾病，氧化应激被认为是ESIS病原体发挥关键作用。当有氧化应激发生，所述ROS产生和抗氧化防御之间的不平衡系统和产生活性氧的克服了细胞抗氧化能力。研究已经表明，暴露于PFOA会在肝脏和肾脏的触发氧化应激。此外，接触PFOA已被证明产生ROS的产生从而引起的在肝癌HepG2细胞和非肿瘤肝L-02的氧化应激电池。我们也曾经报道过接触PFOA在小鼠的肝脏诱导的氧化应激。槲皮素，一个最突出膳食抗氧化剂，可以是一种对患者的肝功能损害有效的治疗剂。大量的研究已经揭示槲皮素在肝脏中，有助于缓解环境污染物引起的氧化通过其抗氧化活性的压力。存在的儿茶酚部分和自由羟基的槲皮素结构是负责其抗氧化和自由基清除剂。在体内条件下，槲皮素直接淬火自由和脂质过氧化物，并增加非酶的抗氧化剂的产生和抗氧化剂酶的活动。MDA被认为是一个脂质过氧化和H2O2作为氧化的诱导压力，这可作为细胞氧化的间接测量伤害。8-OHdG水平已被确定为氧化性DNA的生物标记，这被认为发挥病理生理中起重要作用逻辑进程。在本研究中，MDA含量，H2O2一代化和8羟基脱氧鸟苷形成暴露后显著增加PFOA在小鼠的肝脏。此外，活动SOD和CAT暴露后显著下降到PFOA在小鼠的肝脏。然而，增加的MDA，H2O2和8羟基脱氧鸟苷和下降的SOD和CAT活性均显著恢复通过同时槲皮素进行处理，表明槲皮素保护肝脏对PFOA引起的氧化损伤的小鼠。

据报道，PFOA处理肝脾改变炎症反应和增加促炎细胞因子表达。作为天然存在的抗炎剂，槲皮素已经证明在小鼠中减少了生产的炎症细胞因子和防止肝脏炎症损伤乙醇和CCl4。此外，槲皮素抑制表达式在人锡永肝细胞衍生的常肝细胞系的促炎基因的COX-2，和CRP。由于采用了特殊的

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