尼日尼亚奥约州寨卡病毒感染的病毒学和流行病学调查
A.H.FAGBAMI Virus Research Laboratory, University of Ibadan,Ibadan, Nigeria
摘要
Zika病毒感染的研究是在尼日尼亚奥约州的四个社区进行。Haemagglutination-inhibition测试显示寨卡病毒的高阳性率和其他三种黄病毒的应用。阳性血清的百分比如下:寨卡病毒(31%)、黄热病(50%)、西尼罗河病毒(46%)和Wesselsbron(59%)。中和试验表明40%的尼日利亚人含寨卡于1971和1975之间的病毒分离研究从隔离的轻度发热病例中产生了两种病毒。血凝抑制试验显示针对寨卡病毒抗体病毒中和抗体。50%的寨卡病毒免疫的人独自有寨卡病毒中和抗体或寨卡病毒和另外一个黄病毒。共有针对寨卡病毒的121个血清抗体;其中48例(40%)也显示两个黄病毒抗体,和12例(10%)显示三个或更多其他病毒的抗体。中和抗体的比例和寨卡病毒免疫血清中的其他黄病毒,1型登革热占81%,Wesselsbron黄热病占58%,Wesselsbron占7%,乌干达西尼罗河病毒占6%,Uganda S占3%。
背景
Dick, Kitchen 和Haddow 一起从被标记的恒河猴和在乌干达寨卡森林水池中的非洲埃及伊蚊报到了分离出来的第一例寨卡病毒,其他地方的病毒监测也从其他种类的蚊子中分离出寨卡病毒。
人类感染这种病毒的第一个证据是在1952年Smithburn从东非收集了证明人类血清中和抗体的存在。而后,Simpson报道了在一个乌干达人中分离出寨卡病毒。发现这种病毒的第一个报道是1975年尼日尼亚的Moore等人,在伊巴丹大学医院参加门诊的发热病人的血液中发现三例寨卡病毒。血清学调查几个尼日利亚人,表明尼日利亚人的血清中寨卡病毒和其他黄病毒抗体是常见的。研究已经由不同的人员来确定这些黄病毒在尼日尼亚的感染模式。这篇报道显示了在尼日尼亚奥约州寨卡病毒感染的病毒学和血清学调查数据。
材料与方法
研究范围
这个调查的范围包括:Oshogbo,Igbo-Ora,Ibadan and Oyo。这四个地方在之前已经被 Guyer,Monathetaland Fagbamietal描述过。
血液样本
血液样本收集是为了分离病毒和血清学研究,收集样本的方法已经被Mooreetal和Fagbami探讨过。在Igbo-Ora医院和大学用来分离病毒的被肝素化的手指毛细管血液会从门诊部定期收集。血清学研究的血液收集来自于在医院静脉穿刺的自愿献血者。血清分离通过离心2000r/min15分钟,使用前储存在-20℃的塑料管或宝石瓶中。
抗原
这些病毒过去常常用来准备寨卡病毒、黄热病、登革1型、西尼罗河、Wesselsbron和乌干达病毒的大量毒种和抗原。病毒种子准备在10%幼鼠大脑,悬挂在0-75%含10%正常小鼠腹水的牛蛋白磷酸缓冲盐,在使用前贮存在-60℃。抗原是由蔗糖丙酮根据克拉克和卡萨尔斯的方法提取。
病毒隔离
病毒隔离在白化瑞士老鼠进行。血液稀释1/5在含有2000单位的青霉素和链霉素每600罐毫升的BAPS中,或者在鹰的最小基本培养基(MEME)补充2%的胎儿牛血清。稀释血液样本被接种于鼠脑内,一窝幼鼠0.02ml容量。老鼠被观察14-21天。生病的幼鼠被收获,它们的大脑会为了病毒识别被进一步处理。特异性病毒分离株是由补体结合测试。
血清学测试
Weinbren描述的补体结合实验在滴定盘里完成。血细胞凝集抑制实验以克拉克和卡萨尔斯的microtitre方法用kaolin-treated血清进行。在1/10稀释血清对四个黄病毒抗原:寨卡病毒、黄热病(YF),西尼罗河病毒(WN)和Wesselsbron(WSL)进行了测试。
中和试验
人类血清寨卡病毒抗体的筛查通过幼鼠的中和试验进行。标准常数病毒——常数血清使用技术。所有寨卡病毒免疫血清通过中和试验进一步测试,以排除其他五种黄病毒:黄热病(YF),西尼罗河病毒(WN),Wesselsbron(WSL),登革1型(Den-1)和乌干达(美国)。选择寨卡病毒和血清阳性两个或两个以上的黄病毒进一步测试,以获取端点。端点滴定度用Reedamp;Muench方法计算,用DEX表达。
结果
病毒分离
两例寨卡病毒分离由1971-1975年收集的10778肝素化血液标本组成。一个是1971年7月从2岁男性儿童血液中获得。第二个是1975年5月从Igbo-Ora的10岁男孩血清中获得。这两个分离病毒都是在雨季的最初和高峰——第一个病人有轻微的难以区别的发热性疾病,没有获得其他临床细节。第二个病人表现发热,头痛,身体疼痛。
Haemagglutination-inhibition测试
189人进行HI抗体检测;20个孩子和169名成年人(表1)的阳性血清的百分比如下:寨卡病毒(31%)、黄热病(50%)、西尼罗河病毒(46%)和Wesselsbron(59%)。在一个或多个黄病毒抗体测试中总共有130人(69%)有HI抗体。比例最高(100%)的HI阳性血清发现是在40岁以上年龄组。
Neutralization测试
进行130份HI阳性血清中和试验表明,49(38%)份包含寨卡病毒N抗体。测试59份HI抗体阴性血清显示两个(3%)N寨卡病毒抗体阳性。随后总计300份血清是通过中和测试测试。121份是阳性的,即15/55的孩子(0-19岁)(27%)和106/245的成人(43%)。所有121份寨卡病毒免疫血清进一步检测N抗体与其他黄病毒,企图定义与特定的寨卡病毒血清抗体(表2)的百分比,寨卡病毒血清含有抗体与其他黄病毒如下:黄热病(55%),登革热1型(81%)、Wesselsbron(7%)、西尼罗河病毒(6%)和乌干达年代(3%)。11人(9%)有单型的寨卡病毒抗体;50人(41%)有寨卡病毒和另外一个黄病毒阳性。血清含寨卡病毒抗体和寨卡病毒与另外一种黄病毒更经常遇到。
表1为黄病毒haemagglutination-inhibition测试和寨卡病毒中和抗体在尼日尼亚奥约州人类血清中的测试结果。
NO.(%)HI.positive
Age in years |
NO.tested |
ZIKA |
YF |
WSL |
WN |
Total flavivirus positive |
NO.(%) ZIKA NT postive |
0-9 |
9 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
10-19 |
11 |
3(27) |
5(45) |
6(55) |
5(45) |
7(64) |
4(36) |
20-39 |
166 |
54(33) |
87(52) |
102(61) |
79(48) |
120(72) |
67(40) |
ge;40 |
3 |
2(67) |
3(100) |
3(100) |
3(100) |
3(100) |
1(33) |
All ages |
189 |
59(31) |
95(50) |
111(59) |
87(46) |
130(69) |
72(38) |
Figures in parentheses indicate percentages of those tested in each age group.
表2 其他测试的结果。尼日尼亚奥约州人类血清中寨卡病毒免疫的黄病毒N抗体。
NO.(%) positive to ZIKA and one other flavivirus
Age in years |
NO.ZIKA N positive sera tested |
NO.(%) positive ZIKA only |
YF |
Den-1 |
WN |
WSL |
US |
Total |
0-9 |
1 |
1(100) |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
10-19 |
14 |
3(21) |
3(21) |
2(14) |
0 |
0 |
0 |
5(36) |
20-39 |
100 |
7(7) |
9(9) |
36(36) |
0 |
0 |
0 |
45(45) |
40 |
6 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
All ages |
121 |
11(9) |
12(10) |
38(31) |
0 |
0 |
0 |
50(41) |
Total No. (%) NT positive and
No. (%) NO.(%)
positive to positive ZIKA
Zika 2 and 3 or more
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Age in years |
Other viruses |
Other viruses |
YF |
Den-1 |
WN |
WSL |
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